![](http://img74.chem17.com/gxhpic_7a38f64c7d/5025b523e66012f4bda509ad495feddcb0a5350b03264f901089171d291991ffc57879658c675790.png)
免疫熒光(單標(biāo))服務(wù)
簡(jiǎn)要描述:免疫熒光(單標(biāo))服務(wù),熒光免疫組織化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一,免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)。
產(chǎn)品型號(hào):茁彩生物
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間:2023-12-20
訪 問 量:1132
實(shí)驗(yàn)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
項(xiàng)目編號(hào) | 項(xiàng)目名稱 | 計(jì)價(jià)單位 | 單價(jià) |
ZC1070 | 免疫熒光(單標(biāo)) | 張 | 60元 |
免疫熒光(單標(biāo))服務(wù)服務(wù)介紹:
熒光免疫組織化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一,免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
![](https://img71.chem17.com/gxhpic_7a38f64c7d/cc96a308d3b6dd50d0a7dc8752941872e0c2dc185652eaec7489054e419873f5952ec4103dc9603f.jpg)
免疫熒光(單標(biāo))服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程:
冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
1、 冰凍切片固定:冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
2、 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中低火5min,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)強(qiáng)度根據(jù)組織來確定)
3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
4、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
5、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
6、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
7、 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
8、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm,發(fā)射波長(zhǎng)420nm;FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm;CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560,發(fā)射波長(zhǎng)590nm)
石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2、 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH9.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定)
3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
4、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
5、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
6、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
7、 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
8、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm,發(fā)射波長(zhǎng)420nm;FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm;CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560,發(fā)射波長(zhǎng)590nm)