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外包服務 Tunel
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冰凍切片tunel實驗步驟
1、 冰凍切片固定:冰凍切片從冰箱拿出來復溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
2、 修復:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
4、 加試劑1,2:按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合(試劑1,2為現配現用),加到圈內覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃恒溫孵育2小時,濕盒內加少量水保持濕度。
5、 阻斷內源性過氧.化物酶:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧.化氫溶液(過.氧化氫:甲醇=1:9)室溫避光孵育15 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
6、 加試劑3:切片稍甩干后,每張切片加適量試劑3(converter-POD)覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
7、 DAB顯色:切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為細胞核呈棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
8、 復染細胞核:Harris蘇木素復染3min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
9、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
石蠟切片tunel實驗步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。(冬天適當延長脫蠟時間)
2、 修復:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
4、 加試劑1,2:按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合(試劑1,2為現配現用),加到圈內覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃恒溫孵育2小時,濕盒內加少量水保持濕度。
5、 阻斷內源性過氧.化物酶:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧化氫.溶液(過氧.化氫:甲醇=1:9)室溫避光孵育15 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
6、 加試劑3:切片稍甩干后,每張切片加適量試劑3(converter-POD)覆蓋組織,切片平放于濕盒內,37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
7、 DAB顯色:切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為細胞核呈棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
8、 復染細胞核:Harris蘇木素復染3min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
9、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實驗,樣本不僅含有基礎的動物組織切片,還包括植物葉片、動物細胞、骨片、腦片、皮膚等特殊樣本。染色種類多,染色方法全.石蠟染色,冰切染色均可操作,同時還可以承接整體實驗項目,細胞實驗項目,包括樣本的造模,細胞的培養,以及后續細胞的增殖、細胞粘附、細胞劃痕等實驗.