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免疫組化服務實驗收費標準:
項目編號 | 項目名稱 | 計價單位 | 單價 |
ZC1068 | 免疫組化 | 張 | 35元 |
實驗結果展示:
![免疫組化.png 免疫組化.png](https://img76.chem17.com/gxhpic_7a38f64c7d/514bf1882701518f474ddfb92308a8a081e0361baaa96ace6e5e11eebd5f3bca38a32dc4001cf17f.png)
免疫組化服務實驗流程:
石蠟切片免疫組化實驗步驟:
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2、 抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH9.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復,中火8min至沸,?;?min保溫再轉中低火7min,此過程中應防止緩沖液過度蒸發,切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
3、 阻斷內源性過氧化物酶:切片放入3%過氧化|氫溶液(雙氧水:純水=1:9),室溫避光孵育25 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
4、 BSA或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加用3%BSA或者10%正常兔血清均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。(一抗是山羊來源用10%正常兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉)
5、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)
6、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗(HRP標記)覆蓋組織,室溫孵育50min。
7、 DAB顯色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
8、 復染細胞核:Harris蘇木素復染3min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
9、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
10、 顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
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