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一、掃描電鏡SEM檢測服務的制樣步驟:
(1)取材固定:新鮮組織確定取材部位,盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機械損傷,1-3min內取樣,組織塊面積不超過3mm2,用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污,毛發等去掉,保護好需要掃描的面并做好標記(如在對面進行剪角處理)。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存。
(2)貼壁細胞:貼壁于蓋玻片的細胞培養處理完成后棄培養基,用PBS輕輕漂洗后,棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存。注意保護好掃描面避免劇烈震蕩細胞脫落。
(3)后固定:固定好的樣品經0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)配制1%鋨酸室溫避光固定1-2h。0.1M磷酸緩沖液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。
(4)脫水:組織依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸異戊酯 15min。
(5)干燥:將樣本放入臨界點干燥儀內進行干燥。(干燥的樣品及無機材料不需要以上步驟)
(6)樣本導電處理:將樣本緊貼于導電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺上進行噴金30s左右。
(7)掃描電子顯微鏡下觀察采圖。
二、掃描電鏡SEM檢測服務樣本準備方法及要求:
1、動植物組織樣本:
① 1-3min內取樣,組織塊不超過3mm2,用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污,毛發等去掉,將需要掃描的面做好標記(如在對面進行剪角處理)。
② 取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。尤其是注意保護掃描面。
③ 組織取下后立即投入電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4℃保存,4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
④ 植物樣本放入固定液后需抽氣沉底。
2、細胞樣本:
貼壁細胞:貼壁于蓋玻片的細胞培養處理完成后棄培養基,用PBS輕輕漂洗后,棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4℃保存,4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養基后用PBS輕輕漂洗后,棄PBS加電鏡固定液并將細胞吹打開懸浮于固定液內室溫固定2h,再轉移至4℃保存,4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
3、細菌樣本:
長于固體培養基的細菌:連帶著培養基切下不超過3mm2組織塊,有細菌的一面作為掃描面,放于電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4℃保存, 4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養基后用PBS輕輕漂洗后,棄PBS加電鏡固定液并將細菌吹打開懸浮于固定液內室溫固定2h,再轉移至4℃保存,4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
4、其他如粉末狀材料:
直接準備干燥的粉劑。帶有磁性的金屬材料(鐵,鈷,鎳等)不能做掃描電鏡。