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原位雜交(紅色熒光單標(biāo))
簡要描述:原位雜交(紅色熒光單標(biāo)),原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
更新時間:2024-07-23
訪 問 量:1165
原位雜交(紅色熒光單標(biāo))
一.項(xiàng)目介紹:
1. 原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
2. 所需器材:
脫水機(jī)G-JT12s,包.埋機(jī)G-L5/p5,病理切片機(jī)RM2016,凍臺G-P1,烤箱GFL-70/230,組織攤片機(jī)G-KDP,載玻片及蓋玻片,正置熒光顯微鏡,成像系統(tǒng),恒溫箱,高壓滅菌鍋,移液槍,鐘擺搖床。
3. 主要試劑:DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI。抗熒光淬滅封片劑。雜交液。
二.石蠟切片熒光探針原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟
1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。
2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。
3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
5、消化:根據(jù)組織固定時間長短,切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化 min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
6、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
7、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針 雜交液, 濃度 ,恒溫箱 度雜交過夜。
8、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。
9、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
10.鏡檢拍照:切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光。)DAPI染核,為藍(lán)光。
注意事項(xiàng):
1.mRNA為檢測對象時,需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理。
2.FISH切片保存時間較短,應(yīng)盡快取圖。
原位雜交(紅色熒光單標(biāo))
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實(shí)驗(yàn),樣本不僅含有基礎(chǔ)的動物組織切片,還包括植物葉片、動物細(xì)胞、骨片、腦片、皮膚等特殊樣本。染色種類多,染色方法全.石蠟染色,冰切染色均可操作,同時還可以承接整體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,包括樣本的造模,細(xì)胞的培養(yǎng),以及后續(xù)細(xì)胞的增殖、細(xì)胞粘附、細(xì)胞劃痕等實(shí)驗(yàn)
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