細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號(hào)通路等是測定DNA合成情況研究方向的常用方法之一,用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物(BrdU 、EdU ),兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。
BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,
EdU因?yàn)槠淙擦u基團(tuán)可以與一些熒光染料發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng),無需變形,從而將細(xì)胞標(biāo)記上熒光,因此應(yīng)用更廣泛。
EdU和Brdu檢測區(qū)別
Brdu 檢測增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
Brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸,它被用來檢測細(xì)胞增殖。它可以通過與正常DNA堿基結(jié)合,從而替換掉正常DNA。Brdu在細(xì)胞分裂時(shí)被復(fù)制到DNA中,并在細(xì)胞內(nèi)存在一段時(shí)間,因此它可以用來指示哪些細(xì)胞正在增殖。
Brdu檢測的基本原理是:在細(xì)胞增殖過程中,Brdu會(huì)被復(fù)制到DNA中,并與DNA堿基結(jié)合。這些DNA含有Brdu的細(xì)胞可以通過免疫組化或FISH技術(shù)被檢測出來。
Brdu的檢測可以用于研究細(xì)胞的生長和分裂,也可以用于檢測癌癥細(xì)胞的增殖和活動(dòng)。例如,Brdu可以用來檢測腫瘤細(xì)胞中的DNA損傷,以及化療藥物對腫瘤細(xì)胞的作用。
Brdu也可以用于檢測免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞,例如檢測T細(xì)胞增殖以及抗原激活的活性T細(xì)胞。此外,Brdu也可以用來檢測神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育。
Brdu檢測是一種有效的檢測細(xì)胞增殖的方法,它可以用來研究細(xì)胞的生長、分裂和發(fā)育,以及腫瘤細(xì)胞的活動(dòng)和化療藥物的作用。
EdU 檢測增殖細(xì)胞的特點(diǎn)及原理
EdU(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,5‐乙炔基‐2′脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與5位C原子相連的甲基被乙炔基取代,在S期細(xì)胞增殖時(shí)可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中,
EdU在細(xì)胞增殖時(shí)能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng)(點(diǎn)擊法),從而將增殖的細(xì)胞標(biāo)記上熒光。可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,EdU亦適用于活體注射,穩(wěn)定,對活體沒有副作用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,EdU檢測法更簡單、更快速、更準(zhǔn)確,不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實(shí)情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。
EdU和Brdu檢測區(qū)別見下表
Edu | Brdu | |
---|---|---|
分子量大小 | 252.22 g·mol?1 | 307.098 g·mol?1 |
標(biāo)記檢測方式 | 化學(xué)反應(yīng)(點(diǎn)擊法) | 免疫反應(yīng) |
是否影響其他標(biāo)記 | 不影響 | 影響 |
DNA是否變性 | 否 | 是 |
標(biāo)記檢測時(shí)長 | ≤2.5 h | 過夜 |
檢測靈敏度 | 高 | 一般 |
EdU檢測的優(yōu)點(diǎn):
1、更簡單:僅需EdU孵育;無需抗原抗體反應(yīng),基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法簡單高效,反應(yīng)僅需要幾分鐘;
2、更靈敏:無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴(kuò)散,即便是單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測;
3、更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟,只需2.5 h;
4、更準(zhǔn)確:無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細(xì)胞核邊緣清晰完整;
5、更兼容:允許與多種抗體、熒光染料同時(shí)標(biāo)記;對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記,能夠同時(shí)檢測細(xì)胞其他性狀特征;
6、應(yīng)用性廣,細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、病毒增殖活性檢測,適用于各種動(dòng)物細(xì)胞檢測,對植物細(xì)胞亦適用。