動物基因組DNA快速提取試劑盒適合于從新鮮或凍存組織,如培養的哺乳動物細胞,血液,唾液,毛發(含羽毛),鼠尾及鼠耳等動物組織中快速提取基因組DNA,用于后續的基因 型鑒定等PCR分析檢測。
操作步驟:
提前準備可設置恒定溫度為 55℃和 95℃的熱蓋金屬浴或者PCR儀;提取試劑A在 2~8℃條件下會出現絮狀(結晶)沉淀,為正常現象,試劑平衡至室溫后可自行消失,不影響使用;使用前取出所有試劑于室溫下平衡,顛倒混勻后備用。
1. 消化液的配制:按照樣本數量n配制消化液,具體配制方法如下:分別吸取(n× 50µL提取試劑A+n× 2.5µL提取試劑B)加入潔凈離心管中,移液器吹吸充分混勻,分裝至 0.2mL PCR(離心管)中,每孔 52µL(如樣本過多,可提前預制,于 2~8℃短暫保存,2 小時內使用)。
2. 不同組織樣本基因組DNA的提取:
培養的哺乳動物細胞:將收集到的細胞除去培養液,吸取消化液充分吹吸重懸細胞后,轉移至原消化液孔中。
血液/唾液:吸取不超過 10µL的血液或者唾液加入消化液中,移液器吹吸混勻。
毛發(含羽毛):實驗前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪除毛發(含羽毛)的多余部分,僅需保留毛發的根部(羽軸中羽根)區域,并將其盡可能剪碎至消化液中,移液器吹吸混勻。鼠尾/鼠耳:實驗前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪取不超過 0.5cm的小鼠尾尖或耳尖,并將其盡可能剪碎至消化液中,移液器吹吸混勻(一般情況下,重量約為 10mg的 0.5cm長的鼠尾或鼠耳剛好能浸沒在含有 50μL消化液的PCR管中)。對于新鮮的鼠尾或鼠耳,建議盡量在剪下鼠尾或鼠耳后 30 分鐘內進行基因組DNA提取,否則宜盡快冷凍存放。
3. 將樣本置于 55℃熱蓋金屬浴或者PCR儀,孵育 10 分鐘。
4. 將樣本置于 95℃熱蓋金屬浴或者PCR儀,孵育 5 分鐘(孵育結束后,組織未消化屬于正常現象,不會影響試劑盒的檢測效果)。
5. 將上述提取樣本置于-20℃冷卻 5 分鐘,或 4℃冷卻 15 分鐘以上,以避免氣溶膠污染,瞬時離心后取上清立即進行PCR檢測(若需長期保存樣本,應將未消化的組織去除或將提取物轉移到新的離心管中。大部分情況下,提取物 4℃能保存至少 1 個月,-20℃至少能 保存一年)。