首先,帶大家溫故下酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,簡(jiǎn)寫ELISA),此方法可用于研究領(lǐng)域中的許多靶標(biāo),包括細(xì)胞因子,趨化因子,生長(zhǎng)因子,磷酸特異性靶標(biāo),免疫球蛋白,免疫腫瘤學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)。由于技術(shù)方法成熟,操作流程簡(jiǎn)單,此方法學(xué)深受廣大科研工作者青睞。
那么,ELISA實(shí)驗(yàn)中具體又分為哪幾種檢測(cè)類型呢?
01 夾心法
①將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里,洗滌一次;
②加待測(cè)抗原,如兩者是特異的,則發(fā)生結(jié)合,然后把多余抗原洗除;
③加入與待測(cè)抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體,使形成“夾心";
④加入該酶的底物,若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生,說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。
02 間接法
此法是檢測(cè)抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上,加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合,洗滌后,加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。
03 競(jìng)爭(zhēng)法
此法主要用于小分子物質(zhì)、激素、藥物及半抗原的定量測(cè)定。以測(cè)定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體上,加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原,使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合,經(jīng)過洗滌分離,最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。
到這里我們應(yīng)該會(huì)問一句,什么叫“一步法" ?
不要著急,小Z先用“一步法"跟傳統(tǒng)方法做個(gè)對(duì)比:
以上圖例,相信大家很明顯的看出“一步法"優(yōu)化了操作步驟,縮減了操作時(shí)間,避免了不必要的誤差。
此刻你們腦海里面應(yīng)該飄過很多問號(hào)吧?
小Z再給你們剖析一下“一步法" 的優(yōu)化方案
梯度標(biāo)準(zhǔn)品(即用型)試劑盒提供已知濃度的6支標(biāo)準(zhǔn)品,可直接使用;
樣本充足的情況下,離心后可以直接加樣,無需樣本稀釋,避免污染;
一次性洗板,簡(jiǎn)約時(shí)間,減少誤差;
直接讀數(shù),90分鐘搞定ELISA,實(shí)現(xiàn)時(shí)間上“質(zhì)"的飛躍;