茁彩生物通用的樣本處理方法
土壤:
稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。
糞便:
稱取1g糞便,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。
咽拭子:
加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
植物標本(精提):
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
3、 于4度,8000rpm,離心20分鐘,取上清;
4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yi mi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存備用;
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。
植物標本(推薦):
用預冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)沖洗組織,去除殘留物質(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的 PBS(一般按 1:9 的重量體積比,比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘,取上清檢測。
牛奶:
用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
蜂蜜:
用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
培養的細胞:
A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
C、組織的細胞切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
尿液:
用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
胸腹水:
用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
腦脊液:
用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
樣本收集注意事項:
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。